DETALLES DEL PROYECTO

RESPONSABLE(S):

CédulaNombreCorreo ElectrónicoTeléfonos
V006238078TRIANA A JUANA Llediatriana@yahoo.es0414-4531202

TITULO DEL PROYECTO

Insulinas de secuencia regular y modificada en el tratamiento de la diabetes Mellitas: posibles diferencias en la regulación de la expresión genética.

FACULTAD A LA QUE PERTENECE

Ccs.de la Salud

ACTIVIDAD DEL ARTICULO 42 DE LA LOCTI CON LA CUAL SE RELACIONA EL PROYECTO

Ordinal 8, Aparte a

PROBLEMA DEL PROYECTO

La insulina es una hormona polipeptídica sintetizada en el páncreas, y su principal función es regular los niveles de glucosa sanguínea a través de su interacción con receptores de membrana en varios tejidos blancos, principalmente en el músculo esquelético y el hígado. Igualmente, la insulina estimula la expresión de una gran cantidad de genes relacionados con el metabolismo de carbohidratos y lípidos y se considera como un factor de crecimiento tardío (Tadahiro, 2004). La alteración en los niveles de insulina produce una patología denominada Diabetes Mellitus, una enfermedad que se caracteriza por una hiperglicemia crónica en el torrente sanguíneo, y que afecta a más de 150 millones de personas a nivel mundial. Los pacientes diabéticos se tratan con dosis de insulina humana de secuencia regular o modificada obtenidas por ADN recombinante y/o dieta e hipoglucemiantes orales para aumentar los niveles de la hormona o su acción. Las insulinas de secuencia modificada tienen la finalidad de aumentar la velocidad de acción al no formar agregados, pero su efecto puede variar considerablemente entre individuos e inclusive en el mismo individuo. Aunque las insulinas modificadas han incluido numerosas pruebas de mutagénesis, aberración cromosómica y micronúcleos, fertilidad y daño a fetos, todavía no se han hecho estudios detallados a largo plazo sobre su efecto en el metabolismo humano, por ejemplo, el análisis o efecto sobre la obesidad y/o espesor de la grasa subcutánea, y el potencial carcinogénico. Algunos trabajos recientes han mostrado que no hay diferencias significativas entre el uso de insulina regular o modificada, sin embargo, en otras investigaciones se ha demostrado que el uso de insulinas análogas produce una tendencia hacia la retinopatía (Zib y Raskin, 2006), alergias (Radermecker y Scheen, 2007), malformaciones en fetos, lipoatrofias y vitiligio (Burge y Carey, 2004; Arranz y col., 2004). Paralelamente a estas observaciones se han encontrado diferencias de interacción con el receptor entre la insulina regular y algunas hormonas modificadas, que potencian la actividad mitogénica y aumentan la afinidad de enlace con el receptor del factor de crecimiento I ( Hansen y col.,1996). Una de las herramientas que se han utilizado para intentar conocer el mecanismo de acción de la insulina a nivel celular, es el estudio sobre su efecto en algunos microorganismos procariotas y eucariotas, entre ellos: Neurosporacrassa, Aspergillus fumigatus, Tetrahymena pyriformes (Le Roith y col., 1980), Echerichia coli (Le Roith y col., 1981) y Saccharomyces cerevisiae (Berdicevsky y Mirsky, 1994; Camargo y Bastidas, 2002). Diversos análisis han demostrado la existencia de receptores y proteasas específicas en estos microorganismos para enlazar y degradar a la insulina humana (McKenzie y col., 1988), y la hormona tiene efectos sobre la viabilidad y proliferación celular similares a los encontrados en las células de mamíferos. En este trabajo se pretende analizar el efecto de las insulinas comerciales de secuencia regular y modificada en el crecimiento celular y en la expresión genética de la levadura Saccharomyces cerevisiae, con la finalidad de establecer si existen diferencias de acción entre ambas hormonas, un aspecto que podría considerarse para mejorar los tratamientos aplicados a enfermos diabéticos.

OBJETIVOS DEL PROYECTO

GENERAL ¿ Determinar diferencias en la regulación de la expresión genética entre las insulinas de secuencia regular y modificada utilizadas en el tratamiento de la Diabetes Mellitus ESPECÍFICOS ¿ Analizar el efecto general de las insulinas comerciales de secuencia regular (Cristalina) y modificada (Lispro) en el crecimiento celular de la levadura Saccharomyces cerevisiae ¿ Determinar el patrón polipétidico de expresión genética de la levadura Saccharomyces cerevisiae en presencia de las insulinas comerciales regular y análoga ¿ Determinar el efecto de las hormonas regular y modificada en un sistema traduccional in vitro de levadura.

ACTIVIDADES DEL PROYECTO

¿ EFECTO DE LAS INSULINAS EN EL CRECIMIENTO CELULAR Para los ensayos de crecimiento celular se utilizará la cepa de Saccharomyces cerevisiae A364A. La levadura se crecerá aeróbicamente a 30 ºC en medio líquido YM-1. El crecimiento se seguirá por medidas de absorbancia a 600 nm. Se estudiará separadamente el efecto de las insulinas comerciales (Cristalina de secuencia regular y Humalog (Lispro) modificada obtenidas de ADN recombinante 100 U/ml, marca Lily) en el crecimiento del micoorganismo. ¿ EFECTO DE LAS INSULINAS EN LA EXPRESIÓN GENÉTICA Se analizará el patrón polipeptídico de expresión genética de la levadura crecida en presencia de ambas insulinas comerciales por electroforesis en geles de poliacrilamida-SDS. Los polipéptidos serán visualizados por tinción con nitrato de plata y analizados por densitometría. ¿ EFECTO DE LAS INSULINAS EN UN SISTEMA TRADUCCIONAL DE LA LEVADURA Se obtendrá un sistema traduccional libre de células de la fracción citoplasmática de la levadura y se estudiará el efecto de las insulinas de secuencia regular y modificada en la síntesis de proteínas y formación de los complejos de iniciación traduccionales.

PRODUCTOS DEL PROYECTO

Con los resultados de la investigación se podrían aclarar algunas diferencias entre la insulina de secuencia regular y modificada en cuanto al efecto sobre la expresión genética y actividades mitogénicas. Dichas diferencias podrían considerarse para las dosis de insulinas análogas que se le suministran a los pacientes diabéticos y de esta forma mejorar los tratamientos. Al mismo tiempo, se establecerá un modelo o sistema con la levadura que permitirá el análisis de la acción molecular de las hormonas con más detalle y relacionado con la expresión de genes específicos activados por la insulina.

DEPENDENCIA RESPONSABLE DEL PROYECTO:

OTRA (especifique)

DEPENDENCIA ESPECIFICA

Facultad de ciencias de la salud - Aragua

FECHA INICIO

01/07/2007

FECHA FIN

01/11/2008

MONTO DEL PROYECTO

Bs. 100.000.000,00, Bs.F. 100.000,00
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