DETALLES DEL PROYECTO

RESPONSABLE(S):

GermŠn Fraile V

TITULO DEL PROYECTO

Evaluación in Vitro de nuevos complejos de oro (I) sobre la actividad de la tioredoxina y reductasa y sobre eventos mitocondriales, relacionados con enfermedades autoinmunes y malignas

FACULTAD A LA QUE PERTENECE

Ccs.de la Salud

ACTIVIDAD DEL ARTICULO 42 DE LA LOCTI CON LA CUAL SE RELACIONA EL PROYECTO

Ordinal 8, Aparte a

PROBLEMA DEL PROYECTO

Las enfermedades autoinmunes, malignas o infecciosas tienen elevadas prevalencias en todos los países y en particular, en aquellos en vías de desarrollo. Esta realidad impone la necesidad de impulsar la búsqueda de fármacos alternativos a los ya existentes cuyas eficacias terapéuticas son relativamente bajas y sus costos muy elevados. El presente proyecto es un intento de establecer las posibilidades terapéuticas de un grupo de nuevos compuestos sintetizados en el IVIC que contienen átomos de oro como la base fundamental de sus estructuras químicas. Esta elección se justifica debido al conocimiento actual del blanco molecular que los complejos de oro afectan dentro de las células. Este blanco, la enzima tioredoxina reductasa es, por una parte, particularmente sensible a las sales de oro que se emplean para tratar la artritis reumatoide y por la otra, muy relacionada con diversas patologías entre las que destacan las enfermedades malignas. Entonces, queremos sacar provecho de este conocimiento para determinar cuáles combinaciones de átomos de oro con los diferentes ligandos coordinados con el metal, conducen a los mayores efectos inhibidores de esta enzima así como los eventos que esta inhibición pueda causar en las mitocondrias y cultivos celulares in vitro.

OBJETIVOS DEL PROYECTO

Objetivo general: Determinar la actividad tanto de la tioredoxina reductasa como de algunos parámetros funcionales de mitocondrias aisladas de placenta humana en presencia de diferentes complejos que contienen el motivo oro-trifenilfosfina Objetivos específicos: Evaluar, en la presencia y ausencia de los complejos de oro CQAu, CTZAu, BmAu y auranofina: A.-La actividad de las enzimas tioredoxina reductasa, glutation peroxidasa y glutation reductasa. B.-La generación de especies reactivas de oxigeno en mitocondrias y en leucocitos humanos. C.-La generación de ATP D.-El hinchamiento mitocondrial E.-La liberación de citocromo c mitocondrial F.-El potencial de membrana mitocondrial en neutrófilos y linfocitos humanos.

ACTIVIDADES DEL PROYECTO

.-Método espectrofotométrico de reducción del ácido 5,5¿-ditiobis-2-nitrobenzoico (DTNB) (Gromer y cols., 2002). .-Efectos de los complejos de oro sobre la inducción del hinchamiento de las mitocondrias (Rigobello y cols., 2002). .-Efectos de los complejos de oro sobre la succinato deshidrogenasa mitocondrial (Pennington, 1961). .-Determinación del potencial de membrana mitocondrial. .-Externalización de fosfatidilserina y captación de ioduro de propidio. .-Determinación de la producción intracelular de peroxido de hidrógeno mediante citometría de flujo. .-Detección de especies reactivas de oxígeno (ROS) intracelulares mediante fluorometría (Pepperl y cols., 2001). .-Determinación de ROS mitocondrial mediante quimioluminiscencia (QL) (Li y cols., 1999).

PRODUCTOS DEL PROYECTO

Los ensayos propuestos permitirán definir cuáles son los ligandos acoplados a los átomos de oro que ofrezcan la mejor combinación para inhibir la tioredoxina reductasa, así como para afectar de un modo positivo los eventos pro-apoptóticos relacionados con esa inhibición. Tal definición permitirá el desarrollo de nuevas drogas útiles para el tratamiento de enfermedades cuyo inicio y progresión estén íntimamente relacionados con la sobre-expresión de dicha enzima. Estas enfermedades incluyen a diversos tipos de cáncer así como enfermedades autoinmunes.

DEPENDENCIA RESPONSABLE DEL PROYECTO:

OTRA (especifique)

DEPENDENCIA ESPECIFICA

Facultad de ciencias de la salud - Aragua

FECHA INICIO

01/05/2007

FECHA FIN

01/05/2009

MONTO DEL PROYECTO

Bs. 69.073.100,00, Bs.F. 69.073,10
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