DETALLES DEL PROYECTO

RESPONSABLE(S):

CédulaNombreCorreo ElectrónicoTeléfonos
V010146766CONTRERAS M LELLYScontrera@uc.edu.ve04144955454

TITULO DEL PROYECTO

Expresión, purificación y caracterización de la proteína supresora de metástasis en cáncer de mama, BRMS1.

FACULTAD A LA QUE PERTENECE

Ciencias y Tecnología

ACTIVIDAD DEL ARTICULO 42 DE LA LOCTI CON LA CUAL SE RELACIONA EL PROYECTO

Ordinal 8, Aparte a

PROBLEMA DEL PROYECTO

La proteína supresora de metástasis en cáncer de mama (BRMS1) es un miembro de la familia de proteínas que activamente suprimen la metástasis tumoral. Entender como BRMS1 media la supresión del proceso metastásico es una etapa clave a la hora diseñar nuevas terapias que pudieran prevenir y tratar pacientes en el último estado del cáncer de mama. Con la finalidad de adentrarnos en aspectos funcionales que apoyen la supresión de la metástasis mediada por BRMS1 en esta investigación experimental se pretende estudiar la expresión y purificación de BRMS1 así como su caracterización bioquímica básica.

OBJETIVOS DEL PROYECTO

1.- Estandarizar las condiciones de expresión del plásmido pDEST17 contentivo del gen brms1 para obtener una sobre-expresión de la proteína BRMS1. 2.- Determinar la ubicación celular de BRMS1 expresada 3.- Purificar la proteína BRMS1 expresada 4.- Cuantificar la cantidad de BRMS1 producida 5.- Caracterizar bioquímicamente a BRMS1 determinando su masa molecular y sus propiedades hidrodinámicas aplicando la técnica de filtración en gel. 6.- Obtener el espectro de masas de la BRMS1 purificada.

ACTIVIDADES DEL PROYECTO

Como punto de partida del proyecto está el hecho que nuestro laboratorio ya tiene clonado el gen brms1 en el plásmido pDEST17, de forma que en esta 2da etapa estandarizaremos la expresión del plásmido pDEST. Para ello evaluaremos diferentes concentraciones de agarosa e IPTG, como inductores de la expresión así como los tiempos de crecimiento y la temperatura de incubación de los cultivos. La condición óptima de expresión se detectará por medio de electroforesis en geles de poliacrilamida. La ubicación celular de BRMS1 se determinará evaluando su presencia en el sobrenadante libre de células y en la fracción membranal después del lisado bacteriano y su posterior separación por centrifugación. Dado que el de brms1 clonado incluyó una secuencia de nucleótidos que especifican para histidina (His), la proteína BRMS1 expresada tiene un marcaje de His que nos permitirá purificarla por cromatografía de afinidad de Ni o Co. El grado de pureza se evaluará también por electroforesis en geles de poliacrilamida. La cuantificación de la proteínas purificada se hará por del coeficiente de extinción molar de BRMS1. La masa molecular de BRMS1 se obtendrá a partir del volumen de elusión de BRMS1 en Sephacryll HR-100, una resina de exclusión molecular previamente calibrada con marcadores proteicos. A partir de los radios dinámicos de las marcadores proteicos utilizados se determinará el radio de Stokes de BRMS1, su grado de hidratación y su extrapolación de la posible forma de BRMS1 en solución. Finalmente, la espectroscopía de masas se utilizará para confirmar la masa molecular esperada de BRMS1.

PRODUCTOS DEL PROYECTO

- Los resultados logrados con la purificación de BRMS1 facilitarán los estudios de interacción de la proteína con sus blancos biológicos para ir esclareciendo la base de la función celular anti-metastásica de BRMS1; y permitirán iniciar la caracterización biofísica y estructural de BRMS1 para obtener un panorama general de la relación estructura-función. - Una publicación internacional. - Formación de recursos humanos: dos tesis, una de pre-grado y otra de post-grado (doctorado). - Una pasantía de investigación para capacitación en técnicas moleculares de última generación. - Estrechar lazos de relación interinstitucional con universidades en Estados Unidos y España. - Asentar las bases para una terapia alternativa del cáncer de mama basada en BRMS1.

DEPENDENCIA RESPONSABLE DEL PROYECTO:

OTRA (especifique)

DEPENDENCIA ESPECIFICA

Biología

FECHA INICIO

01/03/2010

FECHA FIN

01/03/2011

MONTO DEL PROYECTO

Bs. 40.000.000,00, Bs.F. 40.000,00
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