DETALLES DEL PROYECTO

RESPONSABLE(S):

CédulaNombreCorreo ElectrónicoTeléfonos
V10146766LELLYS CONTRERAScontreras@uc.edu.ve0414-4955454

TITULO DEL PROYECTO

“Estabilidad térmica de XynB2 por fluorescencia en estado estacionario”

FACULTAD A LA QUE PERTENECE

Ciencias y Tecnología

ACTIVIDAD DEL ARTICULO 42 DE LA LOCTI CON LA CUAL SE RELACIONA EL PROYECTO

Ordinal 8, Aparte a

PROBLEMA DEL PROYECTO

La caracterización de la estabilidad térmica de una enzima parte por conocer muy bien la dependencia de las propiedades conformacionales y estructurales con la temperatura. Diversas técnicas han sido utilizadas para analizar los aspectos del desplegamiento térmico, entre ellas se resaltan la espectroscopia de absorción, de dicroísmo circular y de fluorescencia, siendo ésta última una técnica potente para monitorear las transiciones de desplegamiento y caracterizar las propiedades del estado plegado y desplegado ya que la fluorescencia producto de los residuos de triptófano (Trp) es muy sensible al ambiente local. En el caso de XynB2 esta es una proteína que posee en su secuencia aminoacídica 17 residuos de Triptófano, por lo que es predecible pensar que la emisión de fluorescencia de ésta será considerable y permitirá determinar los posibles cambios conformacionales que tienen lugar en la proteína cuando ésta se desnaturaliza. La transición de desplegamiento térmico de una proteína no solo se caracteriza por la desaparición o pérdida de su bien definida estructura tridimensional sino también por los cambios en compactación de la estructura desplegada o por la inducción pronunciada de agregación. En principio todos estos fenómenos pueden alterar el microambiente de los fluoróforos intrínsecos de la proteína y por ende afectar el espectro de emisión. Por ello en esta investigaciòn analizaremos las transiciones de desplegamiento de XynB2, una proteína multitriptófano y la accesibilidad de los fluróforos intrínsecos de XynB2 principalmente por el uso de la señal de fluorescencia de la proteína. Se espera que estos datos enriquezcan los estudios previos hechos en el laboratorio y nos aporte una visión global de la estructura y estabilidad de XynB2.

OBJETIVOS DEL PROYECTO

General: Caracterizar la estabilidad térmica y química de la enzima recombinante XynB2 por espectroscopia de fluorescencia en estado estacionario. Específicos: Determinar las curvas de estabilidad térmica de XynB2. Estudiar el efecto de la concentración de XynB2 sobre la estabilidad térmica. Caracterizar las propiedades de los estados nativo y desplegado de Xyn B2 por efecto de la temperatura. Comparar los estados de desplegamiento térmico y químico por GdnCl de XynB2. Caracterizar la cinética de desplegamiento de XynB2. Determinar el grado de accesibilidad de los residuos de Trp de XynB2 por atenuación de la fluorescencia por acrilamida.

ACTIVIDADES DEL PROYECTO

El tiempo de ejecución del proyecto es de un año, contado a partir del momento de su instalación. Para la ejecución del proyecto solo se requiere adquirir un baño de agua recirculante que permita enfriar el peltier del fluorímetro. Este equipo se conectará al fluorímetro ubicado en el laboratorio de Biotecnología. La instalación de este accesorio al equipo y el adiestramiento del personal se realizarán la misma semana de su recibimiento. Una vez recibido el baño se conectará al fluorímetro y se iniciarán los experimentos de estabilidad tèrmica de la enzima XynB2. Sin embargo dada la aplicabilidad de uso del fluorímetro, este baño también podrá ser utilizado en otras líneas de investigación y/o tesis del Dpto. de Biología. Con respecto a este punto, ese equipo se utilizará activamente en la ejecución de la tesis doctoral de la Lic. Denny Quintero cuyo objetivo es la caracterización biofísica de BRMS1, una proteína supresora de metástasis

PRODUCTOS DEL PROYECTO

-2 tesis de licenciatura -1 tesis de doctorado. -Prestación de servicios a otras dependencias de la Facyt y de la UC. -Presentación de resultados en congresos internacionales -Publicaciones en revistas arbitradas.

DEPENDENCIA RESPONSABLE DEL PROYECTO:

Facultad Experimental de Ciencia y Tecnología

DEPENDENCIA ESPECIFICA

ninguna

FECHA INICIO

01/04/2009

FECHA FIN

01/04/2010

MONTO DEL PROYECTO

Bs. 15.000.000,00, Bs.F. 15.000,00
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