DETALLES DEL PROYECTO

RESPONSABLE(S):

CédulaNombreCorreo ElectrónicoTeléfonos
V004456990DELGADO H VICTOR Sdelgadov@uc.edu.ve04144253351
V009636868BARRIOS EMILIA ELENAbarrios.emilia@gmail.com0414-4385698

TITULO DEL PROYECTO

DIAGNOSTICO INMUNOLÓGICO DE Blastocystis hominis, Cryptosporidium sp y Cyclospora

FACULTAD A LA QUE PERTENECE

Ccs.de la Salud

ACTIVIDAD DEL ARTICULO 42 DE LA LOCTI CON LA CUAL SE RELACIONA EL PROYECTO

Ordinal 8, Aparte a

PROBLEMA DEL PROYECTO

1.En los últimos años, nuestro laboratorio se interesa en el estudio de los parásitos protozoarios, Blastocystis hominis, Ciclospora cayenensis y cryptosporidium sp, en un inicio por su condición de parásitos oportunistas re-emergentes, en pacientes con SIDA (Barrios y col., 2004). 2.En los actuales momentos el interés se fundamenta además en la alta incidencia de Cyclospora y Cryptosporidium como agentes causales de diarrea en niños y en su presencia frecuente en adultos portadores sanos; y de reportes que relacionan a B. hominis con cuadros diarréicos solo o en asociación con amibas comensales. La prevalencia de Cryptosporidium en niños se ubica entre 1 y 32% dependiendo de las condiciones clínicas epidemiológicas y B. hominis en 61, 6% en pacientes con síntomas intestinales y 41,6% en asintomáticos. 3.Cryptosporidium sp y Ciclospora sp es un coccidio que puede inducir diarrea aguda autolimitante en pacientes inmunocompetentes o severa en inmunosuprimidos, en nuestro país es escasa la información epidemiológica. La infección por B. hominis puede ser de curso sintomático o presentar sintomatología como, diarrea, dolor abdominal, anorexia, deshidratación, vómitos, perdida de peso, además se ha asociado a síndrome de colon irritable y artritis reactiva. Ambos parasitos pueden ser transmitidos por vía fecal-oral a través de alimentos y aguas contaminadas. 4.El diagnóstico de la infecciones por ambos protozoarios se realiza por métodos de demostración del parásito en el examen directo para B. hominis y en frotis de heces coloreados con Kinyoun para Cryptosporidium y Cyclospora. El primero de fácil ejecución para ubicar la infección, pero no para asociarla a sintomatología, requiriendo la ejecución de métodos copro-parasitológicos y serológicos para descartar otros protozoarios (amibas, coccidios) y helmintos. El segundo con la limitación de que es una metodología laboriosa que debe complementarse con morfometría para diferenciar Crypstosporidium de Ciclospora y requiere de un personal bien entrenado. Los estuches diagnósticos basados en la captura de copro-antígenos de Cryptosporidium en el mercado presentan una baja sensibilidad y especificidad en comparación con la coloración de Kinyoun y no existen esta herramienta diagnóstica para B. hominis. 5.Los estudios desarrollados en nuestro laboratorio basados en la experiencia con S. mansoni han permitido evaluar la composición proteíca e isoenzimática de B. hominis, encontrando diferencias en algunas isoenzimas en aislados del parásito provenientes de pacientes sintomáticos y asintomáticos que podrían relacionarse a el comportamiento ambivalente patógeno/comensal de éste protozoario. Así como, la estandarización de un modelo de mantenimiento experimental en ratones inmunosuprimidos para Cryptosporidium sp, empleado como fuente de amplificación de ooquistes para la de epítopes carbohidratos y producción de antígenos para pruebas serológicas. Los hallazgos anteriores evidencian la necesidad de desarrollar alternativas diagnósticas serológicas de mayor sensibilidad y especificidad para estos protozoarios, y en particular técnicas moleculares que permitan discriminar los aislados patógenos de B. hominis con propósitos terapéuticos.

OBJETIVOS DEL PROYECTO

1.Diagnosticar los pacientes infectados con B. hominis, Cryptosporidium y Ciclospora por ensayos coproparasitológicos específicos. 2.Recolectar sueros de pacientes infectados con B. hominis, Cryptosporidium o Ciclospora. 3.Recolectar sueros controles negativos. 4.Purificar estadios de B. hominis, Cryptosporidium o Ciclospora aislados de pacientes sintomáticos y asintomáticos. 5.Preparar antígenos solubles de B. hominis, Cryptosporidium o Ciclospora. 6.Caracterizar el perfil protéico y isoenzimático de los antígenos solubles. 7.Identificar las proteínas antigénicas de B. hominis, Cryptosporidium o Ciclospora reconocidas por los sueros de pacientes sintomáticos y asintomáticos de forma diferencial. 8.Purificar las proteínas antigénicas em antígenos solubles B. hominis, Cryptosporidium o Ciclospora. 9.Elaborar la técnica de ELISA, empleando lãs proteínas antigénicas purificadas. 10.Comparar la sensibilidad y especificidad de la ELISA en comparación con técnicas coproparasitológicas.

ACTIVIDADES DEL PROYECTO

1.Compra de reactivos y materiales para la ejecución de las pruebas coproparasitológicas (Directo, Kato, Baerman, coloraciones especiales (Kinyoun, Tricrómica serológicas y Quensel), serológicas (ELISA) y Bioquímicas (electroforesis en geles de poliacrilamida y agarosa, electroelución, electrotransferencia) y moleculares (reacción en cadena de la polimerasa, PCR): a)Colorantes: verde malaquita, sudan III, azul de metileno, glicerol, verde fast, lugol, fucsina b) materiales: papel celofán, vasos cónicos, pipetas de transferencia y Pasteur, vasos de precipitado, pipetas serológicas de vidrio, cubetas de coloración, laminas cubreobjetos y portaobjetos, aceite de inmersión, placas de poliestireno para ELISA, conjugados, fluorocromos. c) Solventes y desinfectantes: alcohol ácido, etanol, ácido acético y metanol. d) sales minerales para buffers: carbonato de sodio, fosfato de sodio, fosfato de potasio, cloruro de sodio, tris-base, dodecil sulfato de sodio y EDTA e) reactivos de electroforesis y electrotransferencia: acrilamida, bis-acrilamida, agarosa, persulfato de amonio, temed, acrilamida, membranas de nitrocelulosa. Compra de materiales y reactivos para purificación de estadios parasitarios provenientes de heces de pacientes infectados: mallas metálicas, tubos cónicos, pipetas de transferencia, PBS, ficoll, diatrizoato de sodio, gradillas. 2.Compra de materiales y reactivos para cultivo in vitro de B. hominis : medios de cultivo, líneas celular aislada de cáncer intestinal, suero fetal bovino, antibióticos, frascos para medios de cultivo de vidrio, frascos de cultivo de plástico, jarras de anaerobiosis. 3.Compra de animales, materiales y reactivos para obtención de ooquistes de Cryptosporidium y Ciclospora del ciclo de mantenimiento in vivo ratones isogénicos, equipo de microdisección, jaulas metálicas, bebederos de vidrio, anestésico, ciclofosfamida, dexametasona. 4.Obtención de estadios de B. hominis, Cryptosporidium y Ciclospora del ciclo de mantenimiento in vivo e in vitro. 5.Elaboración de antígenos solubles de B. hominis, Cryptosporidium y Ciclospora. 6.Caracterización proteica, isoenzimática y antigénica de los antígenos solubles. 7.Purificación de los antígenos seleccionados bajo los criterios de sensibilidad y especificidad. 8.Incorporación de profesores, estudiantes de pre-grado y post-grado para el desarrollo de trabajos de ascenso, tesis y pasantías. 9.Informe al Ministerio del Poder Popular para la Salud y Desarrollo tanto Regional como Nacional, sobre los diagnósticos confirmados de esquistosomiasis.

PRODUCTOS DEL PROYECTO

1.Estandarización de una prueba de ELISA para el diagnóstico de B. hominis, Cryptosporidium y Ciclospora. 2.Estandarización de esquemas de mantenimiento in vitro e in vivo de B. hominis, Cryptosporidium y Ciclospora. 3.Obtención de datos epidemiológicos de las infecciones por B. hominis, Cryptosporidium y Ciclospora, en relación a prevalencia, número de formas parasitarias por gramo de heces, etc. 4.Diagnóstico de pacientes con B. hominis, Cryptosporidium y Ciclospora en la localidad estudiada. 5.Obtención de marcadores serológicos para el diagnóstico clínico de los pacientes infectados. 6.Establecimiento de una relación entre patología y presencia de estadios parasitarios. 7.Desarrollo de actividades de investigación de estudiantes de pregrado, postgrado y profesores de diferentes Escuelas de la Facultad de Ciencias de la Salud, así como de otras instituciones a nivel local, regional y nacional. 8.Entrenamiento de personal profesional y técnico interesado en el manejo de técnicas copro-parasitológicas, coloraciones especiales y serológicas para el diagnóstico de protozoarios y helmintos en general. 9.Desarrollo de tesis de estudiantes de pre y postgrado pertenecientes a diferentes programas de estudio a nivel local y regional. 10.Producción de artículos científicos en revistas nacionales e internacionales en base a las actividades de investigación desarrolladas en el laboratorio.

DEPENDENCIA RESPONSABLE DEL PROYECTO:

OTRA (especifique)

DEPENDENCIA ESPECIFICA

Facultad de ciencias de la salud - Valencia

FECHA INICIO

01/05/2008

FECHA FIN

01/12/2011

MONTO DEL PROYECTO

Bs. 500.000.000,00, Bs.F. 500.000,00
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