DETALLES DEL PROYECTO

RESPONSABLE(S):

CédulaNombreCorreo ElectrónicoTeléfonos
V003129165COMACH P GUILLERMO Agcomach@yahoo.com04165432116

TITULO DEL PROYECTO

Determinación Mediante Citometría de Flujo de la Relación de Linfocitos T Cd4+/Cd8+ en Pacientes con Dengue en Maracay, Venezuela: 2007-2008

FACULTAD A LA QUE PERTENECE

Ccs.de la Salud

ACTIVIDAD DEL ARTICULO 42 DE LA LOCTI CON LA CUAL SE RELACIONA EL PROYECTO

Ordinal 8, Aparte a

PROBLEMA DEL PROYECTO

Existen cuatro serotipos del virus dengue (DENV-1,-2,-3 y -4) estrechamente relacionados en el género Flavivirus, familia Flaviviridae, que pueden causar más morbilidad y mortalidad en los humanos que cualquiera otra enfermedad por arbovirus en el mundo de hoy. Los cuatro serotipos producen la enfermedad en los humanos. Las infecciones por el virus dengue pueden ser asintomáticas, o causar Fiebre de Dengue (FD), Fiebre Hemorrágica de Dengue (FHD), y Síndrome de Choque por Dengue (SCD) (Rosen. 1982). Se estima que más de 2 billones de personas están en riesgo de infectarse con dengue, y millones de personas han sido afectadas en epidemias recientes. Mundialmente, las estimaciones indican que cada año se infectan con el virus dengue 50 a 100 millones de personas (Gubler,. 1995) y se producen 250,000 y 500,000 casos de FHD/SCD, con una tasa de mortalidad entre 1% y 5% (Halstead, 1993). La Organización Mundial de la Salud reportó recientemente que Venezuela tuvo las más alta morbilidad y mortalidad por dengue de las Américas. Maracay, la ciudad más populosa de Aragua, fue donde emergieron los casos de FHD en Venezuela en Octubre de 1989. (Camacho y col 2003). Actualmente, el dengue es endémico en Maracay con brotes epidémicos anuales que ocurren entre Junio y Octubre. El brote epidémico más grande ocurrió en el 2001 y fue causado por DENV-3, genotipo III re-introducido en Venezuela en Julio del 2000. Al igual que en otras regiones de Venezuela, en Maracay circularon tres serotipos (DENV-1, DENV-2 y DENV-4) desde 1994 hasta Julio del 2000, y los cuatro serotipos de allí en adelante. (Camacho y col 2003). Al igual que otros virus, el virus dengue induce respuestas inmunes celulares mediadas por linfocitos T. Los linfocitos son células sanguíneas que se desarrollan a partir de las células madres hematopoyéticas, presentes en la médula roja de ciertos huesos, células pluripotenciales que dan lugar a todos los tipos de células sanguíneas: glóbulos rojos (eritrocitos), glóbulos blancos (leucocitos) y plaquetas. Los linfocitos, uno de los tipos de leucocitos, son los responsables de la especificidad inmunitaria. (Sánchez, 2005). La inmunopatología mediada por linfocitos T puede ser importante en la producción de FHD durante las infecciones secundarias (Kurane y Ennis. 1992). La activación de linfocitos T y la producción de citocinas juegan un papel clave en la patogénesis de la FHD (Rothman y Ennis. 1999). Probablemente como resultado de la activación de los linfocitos CD4+ y CD8+, los pacientes de FHD tienen niveles más elevados de receptores solubles de IL-2 (sIL-2R), y de linfocitos CD4+ (sCD4) y CD8+ (sCD8) que los pacientes de FD, 3-4 días después del comienzo de la fiebre, ocurriendo los niveles más altos de IL-2 e IFNγ un día antes de la defervescencia (Kurane,. et al. 1991). El CD69, marcador de activación temprana de células T, NK y monocitos, se expresa en las células CD8+ y NK con mayor intensidad en los pacientes de FHD que los de FD (Green. et al 1999). El CD45 es esencial para la activación de las células T a través de sus receptores T (en ingles TCR), y que las isoformas diferentes de CD45 despliegan habilidades distintas para producir activación de las células T (Altin. 1997). El papel que juega en la activación de las células T en pacientes con dengue no ha sido investigado. Una reversión transitoria de la relación CD4/CD8 ocurre con más frecuencia en los pacientes de FHD/SCD que en los pacientes de FD, 6-10 días después del inicio de la fiebre.

OBJETIVOS DEL PROYECTO

OBJETIVO GENERAL Determinar la relación de linfocitos T CD4+/CD8+ mediante citometría de flujo en pacientes con Dengue en Maracay, Estado Aragua. OBJETIVO ESPECÍFICO ¿ Comparar la población de linfocitos T y sus subpoblaciones en pacientes con FD y FHD. ¿ Determinar las frecuencias relativas de la subpoblaciones CD45+, CD3+, CD4+, CD8+ Y CD69+. en pacientes con FD y FHD/SCD. ¿ Asociar índice CD4+/CD8+ en pacientes con FD y FHD/SCD. ¿ correlacionar los índices CD4+/CD8+ con las formas no severa (FD) y severa (FHD) del dengue.

ACTIVIDADES DEL PROYECTO

Para cumplir con los objetivos propuestos se estudiaran pacientes mayores de cinco años de edad que presenten signos y síntomas compatibles al dengue y que acudan al Hospital Central de Maracay, Ambulatorio del Norte, Seguro Social o que sean detectados mediante la vigilancia activa de febriles en los barrios Caña de Azúcar, 23 de Enero, la Cooperativa y Piñonal. Se estimarán un máximo de 250 pacientes a los cuales se les confirmará la infección viral mediante la técnica de RT- PCR, simultáneamente a dichos pacientes se les realizará separación de los PBMC (Células de Mononucleares de Sangre Periférica) mediante el método de Ficoll-Hypaque para luego hacer el marcaje con anticuerpos monoclonales fluorescentes contra antígenos de superficie CD3, CD4. CD8, CD45 y CD69. De aquí se procederá al análisis de la células T específicas utilizando un Citómetro de flujo FACS Canto II y el software FACS DIVA versión 1.1, para así fenotipificar y cuantificar subpoblaciones de las células en función de su complejidad y tamaño relativos, así como, los grupos de diferenciación expresados en su superficie. Una vez obtenido todos los resultados se procederá al calculo de la relación CD4+/CD8+ para precisar si los índices linfocitos T CD4+/CD8+ muestran cambios importantes durante la evolución de las formas no severas (FD) y severas (FHD) de la enfermedad y si estos cambios pudieran estar específicamente asociados a algunas de estas formas del dengue.

PRODUCTOS DEL PROYECTO

Por medio de la elaboración de dicho proyecto se podrá predecir cuando un paciente puede llegar a evolucionar hacia la FHD para poder manejar oportunamente el caso y evitar consecuencias mayores incluyendo la muerte del paciente.

DEPENDENCIA RESPONSABLE DEL PROYECTO:

OTRA (especifique)

DEPENDENCIA ESPECIFICA

Facultad de ciencias de la salud - Aragua

FECHA INICIO

01/06/2008

FECHA FIN

31/05/2009

MONTO DEL PROYECTO

Bs. 18.082.840,00, Bs.F. 18.082,84
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